在细胞培养的领域，细胞通常被划分为两种类型：贴壁细胞与悬浮细胞。贴壁细胞依赖于附着在培养皿表面才能生长，而悬浮细胞则能够在液体培养基中自由漂浮并繁殖。通常我们认为，贴壁细胞需要关注培养皿的表面是否适合生长，以及是否需要使用胶原蛋白或多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）等材料进行包被以提升附着能力。然而，如果你认为悬浮细胞永远不需要包被，那么你可能被它们轻盈的外表所误导。实际上，在某些重要的实验操作中，悬浮细胞也时常需要暂时“靠岸”，甚至依赖于包被表面提供的帮助。今天我们就来探讨一下：为何悬浮细胞有时需要包被？如何正确进行包被？它适用于哪些细胞？

什么是多聚赖氨酸（PLL）包被？

多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）是一种人造阳离子多肽，拥有丰富的氨基基团，整体带有强正电荷。由于细胞膜表面通常带负电，PLL可以通过静电作用‘‘吸附’’细胞在表面上。这种材料被广泛应用于：

• 难以附着的细胞，如初代神经元和干细胞的培养
• 组织切片或细胞爬片的染色固定
• 增强某些表面抗体或细胞的结合力

在贴壁细胞中，PLL包被可以提高细胞的附着速度和均匀性。而在悬浮细胞中，它则更多用于短期固定和功能性实验的配合。

悬浮细胞需要包被的常见场景

以下是悬浮细胞需要包被的几种常见情况：

1. 免疫荧光成像与免疫染色：悬浮细胞在普通培养皿中操作时，可能在洗涤过程中被吸头吸走或漂移，影响成像质量。使用PLL包被的模型可以实现短暂固定，提高图像的稳定性和信号对噪声的比。
2. 电转染后细胞收集：电转后的悬浮细胞在恢复期间往往较脆弱。如果直接进行离心收集，可能导致大量活细胞的丢失。在PLL包被的培养板上短暂培养4-6小时后，有助于提高后续转染的效率和活细胞比例。
3. 细胞富集或原位功能检测：某些实验需要在细胞“原位”观察反应，例如ELISPOT和细胞毒性检测，要求细胞分布和位置稳定性高，因此常使用PLL或细胞外基质进行包被，以固定悬浮细胞。
4. 悬浮细胞低密度培养聚团问题：在低密度培养中，悬浮细胞可能因游离太快而无法扩增，或形成异常聚团。适当的包被可以提供一些“锚点”，减少细胞之间的漂浮干扰。
5. 外泌体/病毒收集实验中的细胞定点处理：在外泌体研究中，为了保持细胞的分泌稳定，常选择在轻度PLL包被条件下固定悬浮细胞，以避免由于漂浮密度差异影响超natant产物的一致性。

如何正确使用PLL包被？

在使用PLL包被时，需要注意的是，它并不是为了让悬浮细胞像贴壁细胞一样长期生长。多数情况下，这种包被主要用于：

• 实验窗口期的短暂固定
• 提高操作效率与成像质量
• 增强细胞在某些实验平台上的一致性

长期的附着可能会影响细胞的状态，甚至改变其生物学特性，这就需要根据实验的目的合理设置处理的时长和强度。

什么时候不使用包被？

并不是所有的悬浮细胞实验都需要包被。在以下情况下，应避免使用：

• 🚫 长期培养的悬浮细胞，如293F细胞在生物反应器中培养，不宜添加包被，反而应使用低附着力的培养皿（如聚HEMA处理）。
• 🚫 需要完全无附着状态的实验，例如免疫学中的某些流式功能检测及抗体介导的细胞毒性测试等，包被会干扰结果的真实性。

总结

悬浮细胞有时也需要“靠岸”。无论是为了成像、细胞收集、固定还是维持操作的稳定性，适当的表面包被（如PLL）都能够显著提高实验的成功率和数据的质量。在生物医疗研究领域，尊龙凯时强调科学实验的策略与技巧，而包被便是其中一个值得关注的重要环节。