在重组蛋白的表达与纯化过程中，常常通过添加融合标签（如MBP、His、GST）来提升目标蛋白的可溶性，促进其正确折叠，从而提高产量和稳定性。

MBP（Maltose Binding Protein）标签能显著增加蛋白质的溶解性和稳定性，因而帮助提高最终产量。

His（Histidine）标签是通过固定化金属亲和层析（IMAC）纯化重组蛋白的常用工具。这种标签的优势在于其分子量较小，对重组蛋白的功能和应用几乎没有影响，且具备较低的免疫原性。

GST（Glutathione S-Transferase）标签则能够显著增强融合蛋白的可溶性与表达，且便于后续的纯化和实验操作。通过GST标签与固定化的谷胱甘肽之间的亲和作用，可以高效地从表达体系中分离纯化融合蛋白，同时有助于维持蛋白的生物活性和抗原性。

根据实际研究需求，部分融合标签可能需要被去除。使用特定的蛋白酶进行高效且精准的去标签操作，是获得结构和功能“原汁原味”的目标蛋白的关键步骤。常用的蛋白酶包括TEV蛋白酶（TEV Protease，目录号：PE004），其来源于烟草蚀纹病毒（Tobacco Etch Virus, TEV），具备高位点特异性，与凝血酶、Factor Xa和肠激酶等其他蛋白酶相比，TEV酶在底物序列的识别上更为精准，常用于从融合蛋白中去除GST、MBP、His等标签。TEV酶能够特异性识别七肽序列：Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-↓-Gly/Ser（ENLYFQ↓G/S）。

TEV酶的特异性极强，几乎无非特异性切割，确保了蛋白的完整性。其反应条件温和，适用于大多数蛋白，通常在4–30°C下表现出稳定活性，适配更广泛的体系。切割后，目的蛋白的N端仅留有一个额外的Gly或Ser残基。在大肠杆菌中表达时，纯度可达到99%；带有His-tag的酶残留可以通过Ni-NTA轻松去除。

TEV反应缓冲液配方为：50mM Tris-HCl，pH 8.0，0.5mM EDTA，1mM DTT。酶切反应条件为在pH 5.5-8.5及温度4°C-30°C下均有效，一般建议在4°C下过夜或在30°C下反应1小时。每个反应中需添加15μg融合蛋白和适量的TEV蛋白酶。反应完成后，利用15%的SDS-PAGE胶检测酶切效果。

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